-
K transkripci in vitro se používají vektory obsahující promotory bakteriofága T7, T3 a SP6, protože:
-nejsou specificky rozpoznávány bakteriálními RNA-polymerázami
-nepřepisují geny na vektoru
-umožňují přepis genů naklonovaných do vektoru
- nejsou specificky rozpoznávány bakteriálními RNA-polymerázami
- umožňují přepis genů naklonovaných do vektoru
-
Plazmidové vektory s naklonovaným inzertem se do recipientních buněk vnášejí:
transformací
transfekcí
elektroporací
transdukcí
- transformací
- elektroporací
-
Spojení linearizovaného vektoru s klonovaným fragmentem DNA provádíme:
-terminální transferázou
-ligázou
-restrikční endonukleázou
-DNA-polymerázou
ligázou
-
Napište, jak se nazývají vektory obsahující promotor, kterým lze zajistit produkci (přípravu) cizího proteinu v hostitelských buňkách
expresní vektory
-
Napište, jak se nazývají vektory obsahující více počátků replikace (pro různé hostitele)
- pendlující vektory
- kyvadlové
- bifunkční
- shuttle
-
Reportérské geny jsou:
-geny, jejichž exprese je řízena zesilovači (enhancery) nebo silencery
-geny, jejichž transkripty lze v buňkách snadno identifikovat
-geny, jejichž proteinové produkty lze v buňkách snadno identifikovat
geny, jejichž proteinové produkty lze v buňkách snadno identifikovat
-
Maximální klonovací kapacita vektorů odvozených od fága lambda je zhruba:
10 kb
23 kb
45 kb
23 kb
-
Plazmidy používané pro klonování jsou velké:
2-5 kb
200-300 kb
20-30 kb
2-5 kb
-
Inzerční inaktivace je:
-naštěpení vektoru více než jednou restrikční endonukleázou
-vyštěpení střední části substitučního vektoru odvozeného z genomu bakteriofága lambda
-ztráta rezistence k antibiotiku u transformovaných bakterií
-fenotypový projev začlenění fragmentu DNA do klonovacího místa u transformovaných bakterií
fenotypový projev začlenění fragmentu DNA do klonovacího místa u transformovaných bakterií
-
Plazmid pBR325 nese gen pro rezistenci k ampicilinu a gen pro rezistenci k tetracyklinu. Jaké klony se selektují, jestliže cizorodá DNA byla vložena na plazmid pBR325 do genu, který koduje rezistenci k ampicilinu?
- rezistentní k ampicilinu a citlivé k tetracyklinu
- rezistentní k ampicilinu i k tetracyklinu
- citlivé k ampicilinu i tetracyklinu
- citlivé k ampicilinu a rezistentní k tetracyklinu
- citlivé k ampicilinu a rezistentní k tetracyklinu
-
co umožňuje metoda transformace?
- - umožňuje přenos DNA do buňky, v jejímž fenotypu se vnesená genetická inf projeví
- - umožňuje přímý přenos lineární n. kružnicové dvouřetězcové DNA do prokaryotické buňky
-
klon DNA je
soubor identických molekul, fragmentů nebo úseků DNA, připravených množením molekul DNA v hostitelské buňce
-
seřaď kroky při klonování DNA:
-selekce klonů obsahujících rekombinantní DNA
-příprava rekombinantní molekuly DNA
-přenos rekombinantní molekuly do hostitelské buňky
- 1. příprava rekombinantní molekuly DNA
- 2. přenos rekombinantní molekuly do hostitelské buňky
- 3. selekce klonů obsahujících rekombinantní DNA
-
jaké vlastnosti by měl mít klonovací plazmidový vektor?
- autonomní replikace v bakteriální buňce
- přítomnost restrikčních míst využitelných pro klonování
- přítomnost jednoho nebo více markerů pro selekci hostitelské buňky
-
expresní vektory obsahují:
1 signály pro iniciaci transkripci
2 reportérský gen pro selekci v transformovaných buňkách
3 počátek replikace
4 signály pro iniciaci translace
5 geny pro DNA polymerázu
6 promotor
7 vazebné místo pro ribozom
8 klonovací místo
- 1 signály pro iniciaci transkripci
- 2 reportérský gen pro selekci v transformovaných buňkách
- 3 počátek replikace
- 4 signály pro iniciaci translace
- 5 NE
- 6 promotor
- 7 vazebné místo pro ribozom
- 8 klonovací místo
-
pro přípravu homopolymerních konců usnadňujících spojování klonovaných fragmentů DNA použijeme ...
terminální transférázu
-
klonovací místo je ...
- zastoupené pouze jednou v molekule vektoru
- nachází se v reportérském genu využívaném pro selekci rekombinantních klonů
-
jaký postup byste zvolili ke zvýšení podílů rekombinantních molekul při klonování cizorodé DNA do EcoRI místa plazmidového vektoru?
defosforylaci 5´konce vektoru
-
X-gal se používá...
jako chromogenní substrát pro beta-galaktozidázu
-
vektor odvozený z fága lamda (např. gt10) se do recipientních buněk E.coli vnáší ...
transdukcí
-
plazmidové vektory s naklonovaným inzertem se do recipientní buňky vnášejí ...
- transformací
- elektroporací
-
bylo provedeno klonování DNA do vektoru pUC18 nesoucím gen pro rezistenci k ampicilinu (bla) a gen pro beta galaktozidázu (lacZ). Gen bla byl přerušen začleněním klonovaného fragmentu DNA. Na bakteriologických plotnách s živnou půdou obsahující X-gal, IPTG a ampicilin vyrostou transformované bakterie, které přijaly rekombinantní plazmid ve formě ...
nevyrostou žádné kolonie:)
-
kolik cílových míst restrikčního enzymu, který byl použit pro klonování, obsahuje rekombinantní plazmid obsahující fragment cizorodé DNA?
2
-
Rekombinantní DNA je ...
molekula vytvořená spojením cizorodé DNA s klonovacím vektorem
-
kosmidy jsou
hybridy mezi plazmidy a fágy
|
|
