-
K přípravě gradientních roztoků můžeme použít:
NaCl
etanol
glukózu
CsCl
sacharózu
CaCl2
glycerol
-
Přiřaďte správně hodnoty sedimentačníc koeficientů a sedimentujících částic:
(proteiny)
(ribozomální RNA)
(viry)
(mitochondrie)
(ribozómová podjednotka)
- ribozomální RNA 0,5-10S
- proteiny 5-30S
- (viry) 100 až 1000 S (mitochondrie) 30 000 S
- (ribozómová podjednotka) 30 až 80 S
-
Diferenciální centrifugací: ..
-lze izolovat organely
-nelze izolovat ribozómy
-lze oddělit chromozomální DNA od mRNA
-lze oddělit buněčné kompartmenty od cytoplazmy
- lze izolovat organely
- lze oddělit buněčné kompartmenty od cytoplazmy
-
Při izopyknické centrifugaci se biomakromolekuly dělí podle:
-hustoty
-konformace
-velikosti (mol. hmotnosti)
-náboje
hustoty
-
Při izokinetické centrifugaci se biomakromolekuly dělí podle:
-velikosti (mol. hmotnosti)
-náboje
-hustoty
-konformace
velikosti (mol. hmotnosti)
-
Počet otáček rotoru za minutu se označuje zkratkou:
RCF
r
g
rpm
rpm
-
Jednotkou relativní odstředivé síly je:
-min^-1
-metr/sekundu^2
-centimetr/sekundu^2
-počet násobků tíhového zrychlení (g)
-milimetr/sekundu^2
počet násobků tíhového zrychlení (g)
-
Zonální centrifugace využívá pro oddělováni neboli separaci látek:
-opakovanou centrifugaci při postupném zvyšování otáček
-gradientní roztok
-homogenní roztok
gradientní roztok
-
Přiřaďte správně optimální hodnotu relativní odstředivé síly a sedimentující částice:
bakteriální buňky
chloroplasty, mitochondrie, jádra
viry, membránové komplexy
ribozómy
velké proteiny
- (1000×g) bakteriální buňky
- (8000×g) chloroplasty, mitochondrie, jádra
- (50 000×g) viry, membránové komplexy
- (200 000×g) ribozómy
- (400 000×g) velké proteiny
-
Hustotu roztoku CsCl v příslušné vzdálenosti od hladiny stanovíme:
-podle vzdálenosti pohyblivého rozhraní
-spektrofotometricky
-refraktometricky
-refraktometricky
-
Je-li hustota částice menší než hustota prostředí (roztoku):
-částice se pohybuje odstředivě směrem ke dnu
-částice se pohybuje dostředivě směrem k hladině
-částice se koncentrují a vytvářejí zónu
částice se pohybuje dostředivě směrem k hladině
-
V gradientu CsCl+etidiumbromid lze separovat:
-plazmidovou lineární DNA od lineární DNA chromozomové
-stejně dlouhé chromozomální lineární DNA, které se liší obsahem G+C
-plazmidovou CCC formu DNA od relaxované OC formy DNA
- -plazmidovou lineární DNA od lineární DNA chromozomové
- -stejně dlouhé chromozomální lineární DNA, které se liší obsahem G+C
- -plazmidovou CCC formu DNA od relaxované OC formy DNA
-
Izopyknickou centrifugací můžeme stanovit:
-vznášivou hustotu
-sedimentační koeficient
-molekulovou hmotnost
vznášivou hustotu
-
experimentální postup při gradientové centrifugaci zahrnuje tyto kroky:
|
|
